一、生物净化的目的是什么？ 减少或阻止病原体通过一个活体小鼠传染给饲养在屏障设施内的其他小鼠，从而造成屏障内动物的污染。IACUC要求所有外来小鼠进入繁育房间必须净化。

二、小鼠生物净化的方式是什么？ 我们中心全部采用胚胎移植的方法进行净化。胚胎移植是通过从母体（供体，donor female）的输卵管或者子宫中将着床前期的胚胎分离出来后，转移至假孕母鼠（受体，recipient female）的输卵管或者子宫中，最终目的是让移植后的胚胎可以在受体动物生殖道内着床、孕育和出生。

胚胎移植前的受精方式不同又可以分为自然交配取胚胎进行移植（体内交配净化）和通过体外受精（IVF）的方式得到胚胎后进行移植两种方式。

1、收集卵子、体外受精（in vitro fertilization，IVF）和胚胎移植。我们通常称为IVF净化。这个过程受很多因素影响，如精子的质量直接影响到受精率等，虽然我们的大量实验数据表明受精率一般均在60%以上，但我们仍不能保证一次性就可以成功。

2、雄鼠和超排后的雌鼠交配，检栓，然后处死见栓后的雌鼠，收集受精卵，胚胎移植。我们通常称为体内净化。

三、IVF净化和体内净化，如何选择？ 1、选择IVF净化和体内净化，主要看提供的小鼠能不能有效交配。IVF净化不需要考虑雌鼠见栓情况，可以有效避免雌雄鼠交配不见栓导致无法净化，耽误时间。 a、IVF净化，需要安乐死一只雄鼠，取精子；超排并安乐死所有提供的雌鼠。推荐和B6等野生型小鼠交配净化的都直接做IVF净化。 b、体内净化，雄鼠交配完成后继续保留，超排并安乐死见栓雌鼠。 无论哪种净化方式，生仔数量和提供卵子的雌鼠数量直接相关。假如见栓高，IVF净化和体内净化得到的小仔数量差不多。

2、除了根据小鼠能不能有效交配选择外，还需要考虑提供小鼠品系数量、年龄、基因型等，具体要求如下： 小鼠年龄对净化方案选择的影响： 小鼠6-8周对技术超排很不敏感，所以要求自己提供雌鼠时，雌鼠年龄需要控制在3-5周或者9-12周及以上。 小鼠不同基因型对净化方案选择的影响： a、单基因修饰的小鼠，如Tg/KO/KI，假如是杂合并可以和B6、FVB、BALB/c等常见品系交配净化的，请提供至少2只雄性。假如有3只雄鼠，可以考虑提供一只阳性雄鼠（假如有3只雄鼠即可杀一只），安乐死后取精子和B6或其他背景鼠做IVF，一次性可以得到20只以上甚至更多的后代。 b、单基因修饰的小鼠，如Tg/KO/KI，假如是纯合并不可以和B6交配净化的，只能等待繁育后再安排交配或IVF净化。 c、多基因修饰的小鼠，如TKO/DKO/cKO等，只能尽快繁育，得到后代后再做交配或IVF净化。假如是纯合，请提供至少2只雄性，4只雌性。 注意： 净化实验中见栓的雌鼠都会被处死取胚胎，但并不是每个见栓的小鼠都能取到发育正常的胚胎。所以，请留够雌鼠用于繁殖，不要出现断种的情况。

假如不知道如何选择，请联系左小元 584625072@qq.com。

四、如何申请不同方式的生物净化？ 相关要求请参照云大实验动物中心官网：http://www.lac.ynu.edu.cn/cms/10090.html中“科研服务——生物净化/快速繁殖、胚胎/精子冷冻复苏”，净化需要下载并填写申请表格，请到http://ynulac2020.mikecrm.com/AYb9f65下载，此表中有详细的说明，请认真阅读，设计净化方案。 在收到填写完整的表格后，我们也会根据小鼠情况，帮助进一步完善净化方案。

五、做一个小鼠品系的生物净化需要多长时间？ 因实验动物品系不同，其排卵、受孕等操作存在较大差异，因此，净化所需时间每个品系有所不同。一般为2个月后可以拿到4周龄的后代。

六、净化后的小鼠质量如何保证符合SPF？需不需要检测？ 我们动物中有完整的哨兵鼠及随机抽检的体系保障净化后的动物质量符合国家小鼠SPF级别标准。 委托净化方可以送检，检测符合要求，费用由委托方负责。假如不符合要求，动物中心将免费再次做净化并承担上次检测费用，不承担之后的检测费用。

 生物净化方案的制定：

净化，第一考虑因素是需要后代用于什么目的是选择的首要因素，然后根据小鼠雌雄数量、Genotype来决定净化方式。现举例说明：

一、 xxx-Cre（包括CreERT2类小鼠需要净化）：

1. 后代需要xxx-Cre heter：

1) 欲净化小鼠只有♂：        

  a) 数量为1-2只：保险起见，建议和B6或xxx-flox等品系交配净化。        

  b) 数量为3只及以上：杀1♂直接做IVF净化最快捷，相当于一次IVF扩繁。卵子来源可以同时是B6或xxx-flox等品系。    

2) 欲净化小鼠只有♀：         

   a) 数量为1-2只：保险起见，建议和B6或xxx-flox等品系繁殖后，再根据后代性别和Genotype选择净化方案。        

   b) 数量为3只及以上：超排1-3♀，和B6交配净化。但只杀1见栓♀取胚胎，做胚胎移植。其余继续交配繁殖。 

3) 欲净化小鼠♀和♂都有：       

  因为要的后代是heter，可以单独超排♀和B6或xxx-flox等品系交配净化，或者杀1-2只♂做IVF净化，相当于一次IVF扩繁。

2. 后代需要xxx-Cre homo：    

 1) 欲净化小鼠只有♂或♀单一性别：无法做到后代中有homo。    

 2) 欲净化小鼠♀和♂都有：      

     a) ♂数量为1-2只，♀为1-2只：保险起见，建议繁殖后再根据后代数量选择净化方式。♀超排年龄可以是3-5周龄，所以可以考虑♀和父代IVF或交配净化，节约3-5周等待交配繁殖时间。

     b) ♂数量为1-2只，♀为3-4只及以上：超排1-3♀，品系内交配净化。♀≥5只，可以考虑做IVF净化。

二、 xxx-flox（包括CKI类小鼠需要净化）：     

无论后代需要是heter还是homo，都推荐直接和B6或xxx-Cre等品系IVF净化，得到大量净化后的heter后再品系内交配得到homo，或者和xxx-Cre交配繁殖。 

为了交配成homo，然后再用homo小鼠去做净化是最不推荐的，也是最耽误时间的。请同学们考虑。

1. 欲净化小鼠只有♂：     

1) 数量为1-2只：保险起见，建议和B6或xxx-Cre等品系交配净化。    

 2) 数量为3只及以上：杀1♂直接做IVF净化最快捷，相当于一次IVF扩繁。卵子来源可以同时是B6或xxx-flox或xxx-Cre等多个品系。

2. 欲净化小鼠只有♀：    

 1) 数量为1-2只：保险起见，建议和B6或xxx-flox等品系繁殖后，再根据后代性别和Genotype选择净化方案。    

 2) 数量为3只及以上：超排1-3♀，和B6交配净化。但只杀1见栓♀取胚胎，做胚胎移植。其余继续交配繁殖。

三、 多个基因修饰小鼠： DKO，假如是double heter，homo不死亡，建议和B6或double heter做IVF净化，优先选择有一个基因是homo的小鼠。 TKO，也是类似策略。 建议多个基因修饰小鼠的复杂净化，和动物中心左小元老师当面沟通。避免出现长时间无法净化的情况。

四、 注意事项： 1. 无论是交配净化还是IVF净化，所有用于超排的雌鼠♀，年龄要求不少于3只，年龄在3-5周或9周以上，避开6-8周龄激素不敏感期；雄鼠♂年龄最好在10周龄以上，8周龄可以尝试。 2. 向其他老师索求小鼠时，尽可能要3只雄鼠♂。 3. IVF净化时，尽可能考虑是否可以和IVF扩繁一并进行。 4. 小鼠进入云南大学实验动物中心后，第一件事是做Genotyping，验证Genotyping方案可行，确保小鼠Genotype正确。 5. 建议多个基因修饰小鼠的复杂净化，和左小元当面沟通。避免出现长时间无法净化的情况。

                                                                                                                                                （以上内容转自清华大学实验动物中心官网）