购物车
当前位置:首页 > FAQ > 所有问题
胚胎操作相关要求
日期:2021-09-09 编辑:刘琪帅 来源:云南大学实验动物中心 访问量:

   为更好地缓解实验小鼠空间占有率,降低成本,避免珍贵小鼠品系因外界环境、疾病等因素造成不必要的损失。通过一定的保护措施和降温程序,将小鼠的遗传物质冷冻于液氮中,达到长期稳定保存的目的。根据您的用鼠需求,可通过复苏冻存的精子或者胚胎,并将胚胎移植到假孕鼠体内(输卵管移植或子宫移植),详细地记录仔鼠出生情况并安排基因型鉴定等,得到SPF级后代,交付研究人员使用。

保种(精子冻存)

1、精子冻存对提供小鼠的要求:

a)提供冻存精子的雄鼠由我方鉴定确实为纯合子,方可开展冻精实验。

b)每个品系请提供至少3只雄鼠,我们会冻存20管/品系。

c)冻存精子的雄鼠3-6月龄为最佳。

d)雄鼠应尽量选择交配过,且与之交配的雌鼠生产较多的个体。冻存精子前一周禁止再与雌鼠交配,且需要单笼饲养7天。

2、若冷冻过程中发现雄鼠精子质量不佳,则需要您重新提供雄鼠。

3、我方将会对冻存的精子拿出1管进行复苏,主要是为了得到冻存的效率,看是否需要二次冻精。(若您需要确认冻存品系基因型是否正确,则需要用冻精做IVF,胚胎移植后验证小仔基因型,产生的费用详见下方收费标准。)

保种(胚胎冻存)

1、胚胎冷冻对提供小鼠的要求:

a)保种纯合子胚胎:请提供3只3-6月龄具有生育能力的纯合子雄鼠、20只3.5周龄左右的纯合子雌鼠,正常情况下可冻存250枚胚胎

b)保种杂合子胚胎:请提供3只周龄9-20周具有生育能力的雄鼠,由我方提供野生型B6雌鼠30只,正常情况下可冻存400枚左右胚胎。

2、需要冻胚的小鼠由我方进行基因型鉴定,确认无误后方可开展冻胚实验。

3、若在冷冻过程中发现雄鼠精子质量不佳或雌鼠超数排卵效果差,则需要您重新提供小鼠。

4、我方将会对冻存的胚胎拿出50枚进行复苏,主要是为了得到冻存的效率,看是否需要二次冻胚。(若您需要确认冻存品系基因型是否正确,则需要用冻胚进行胚胎移植后验证小仔基因型,产生的费用详见下方收费标准。)

5、我方推荐您采用精子冻存的方式进行小鼠品系保种,因为冻胚需要准备至少20只3.5周龄的雌鼠,这是非常费时费力的过程,也会产生较多的饲养费,并且胚胎冷冻复苏率仅在50%左右,而冻精复苏后可以一次性得到较多数量周龄同步的小鼠。

胚胎净化

1、净化方式的选择:我们全部采用胚胎移植的方法进行净化,净化方式分为交配后取体内胚胎净化和体外受精(IVF)净化。交配净化的不确定性较高,比如交配失败得不到受精卵,或者没得到足够的受精卵供移植,所以该方式需谨慎使用。雄鼠数量足够,我们推荐用IVF方式净化,可以有效控制净化周期,不受是否见栓等因素影响。

2、净化周期:因实验动物品系不同,其排卵、受孕等操作存在较大差异,因此,每个品系净化所需时间有所不同。一般为4个月后可以拿到4周龄的后代。

3、净化实验中见栓的雌鼠都会被处死取胚胎,但并不是每个见栓的雌鼠都能取到发育正常的胚胎。所以,请自行留够雌鼠用于繁殖,避免出现断种的情况。

4、净化对提供小鼠的要求:

a)雄鼠的要求:3-6月龄最佳,最好配繁过。

b)雌鼠的要求:3.5-5周龄或者9周龄以上。必须要避开6-8周龄激素不敏感期。

c)单基因修饰的小鼠,请提供至少5只B6雄鼠,我方提供野生型B6雌鼠。

d)多基因修饰的小鼠,请提供至少5只纯合雄鼠,10只纯合雌鼠,雌鼠越多越好。

5、需要净化的小鼠尽量为基因修饰小鼠,若您需要SPF级普通小鼠,建议您到具有检疫合格证的机构购买。

6、需要净化的小鼠由我方进行基因型鉴定,确认无误后方可进入净化周期。

7、我方将对出生7天后的小仔剪脚趾进行基因型鉴定,您需要提供鉴定使用的引物,我方最终提供给您3只3周龄SPF级阳性小鼠,即净化结束。我们会通知您及时取走净化后的小鼠,否则分笼后将产生饲养费3.5元/天/笼。(若净化品系是多基因修饰小鼠,不保证净化后代能够全部遗传,净化后代如携带有非野生型的基因即认定为阳性小鼠)

8、净化后的质量检测:我们动物中心保证净化后的动物质量符合国家小鼠SPF级别标准。委托净化方可以送检,检测符合要求,费用由委托方负责。假如不符合要求,我方将免费再次做净化并承担上次检测费用,不再承担后续的检测费用。

9、若该品系有影响小鼠存活率或生殖能力等的表型,您必须在净化前告知我方,并对由此导致的一切净化结果负全部责任。

扩繁

  扩繁一般是通过IVF技术,一次性得到大量同周龄小仔,一般来说1只雄鼠能与20只雌鼠做IVF,需要14只左右受体鼠,正常情况下最终可得到80只左右后代,您可以根据所需后代数量来提供雄鼠。

地址: 云南昆明市呈贡区云南大学呈贡校区庆来南路(生科院旁)

邮箱:ynulac@ynu.edu.cn

电话:0871-65955437

版权所有 © 2024 云南大学实验动物中心

技术支持: 南京百迈斯信息科技有限公司

滇ICP备12004993号

扫码

关注我们